Spektrofotometrie v praxi laboratoří

Spektrofotometrie patří mezi základní techniky analytické chemie. Ačkoliv se na první pohled může zdát jednoduchá, praxe ukazuje, že kvalita výsledků závisí na řadě faktorů – od výběru vhodného přístroje po správnou interpretaci dat. V tomto článku shrnujeme principy spektrofotometrie, kdy a proč volit toto měření, na co si dát pozor při měření a jak předejít nejčastějším problémům.

Princip spektrofotometrického měření

Spektrofotometrie měří absorbanci (míru pohlcení světla) určité vlnové délky vzorkem. Na základě Lambert-Beerova zákona lze z absorbance vypočítat koncentraci analyzované látky. Podmínkou je, aby byl vzorek čirý a látka, kterou měříme, vykazovala charakteristickou absorpci.

Využití spektrofotometrie:

• Stanovení iontů, barviv a dalších látek ve vodě, nápojích, půdních extraktech apod.
• Rutinní analýzy v laboratořích vodáren, potravinářských provozů nebo univerzit.
• Kontrola kvality – zejména tam, kde je nutná dokumentace a auditovatelnost výsledků.

Obecné zásady správného spektrofotometrického měření

Správné výsledky začínají správným přístupem. Pro přesná a správná měření je klíčové dodržování těchto zásad:

• Používání čisté kyvety: Nečistoty nebo škrábance zásadně ovlivňují absorbanci.
• Stejný typ kyvety pro kalibraci i  měření: Pokud je to možné, používejte stejnou kyvetu pro kalibraci i měření – a to jak slepého stanovení, tak vzorku. Případně mějte páry kyvet se stejnými optickými vlastnostmi.
• Zajištění teplotní stability vzorku: Teplota vzorku by se během měření neměla měnit a ideálně by měla být stejná jako teplota standardů, se kterými se prováděla kalibrace.
• Homogenita vzorku: Např. u kalných roztoků může být výsledek zkreslený rozptylem světla na částicích, proto je důležité, aby měl vzorek stejné optické vlastnosti v celém svém objemu, a to tak v původním vzorku tak i v reprezentativním alikvotu.
• Pravidelná kalibrace a validace přístroje. Kalibraci spektrofotometru provádí výrobce v předepsaných intervalech v rámci pravidelné servisní údržby. Uživatel provádí kalibraci metod, pokud používá své vlastní metody, nebo validuje výrobcem uloženou kalibraci pomocí certifikovaných ověřovacích standardů.

Kontrola kvality výsledků

Zejména při pravidelném provozním měření je důležité mít zavedeny základní kontrolní mechanismy, mezi které patří:

• Slepé vzorky a kontrolní standardy: Pomohou rozlišit chybu v postupu od problému s přístrojem.
• Opakovaná měření: Měření vzorků duplicitně pomůže odhalit odchylky v pipetování nebo jinou chybu v postupu měření.
• Záznam absorbancí a jejich trendů v  čase: Změny mohou signalizovat znečištění optiky nebo stárnutí lampy.

Nejčastější chyby z praxe – a jak se jim vyhnout

Zkušenosti uživatelů ukazují, že chyby se často opakují – a mnohokrát se jim dá předejít:

• Zaměněné nebo špatně promyté kyvety.
  Tip: Označte kyvety pro kalibraci a vzorky samolepicím štítkem umístěným nad oblastí, kterou prochází měřicí paprsek.
• Vzorky nejsou temperované.
  Výsledky měření se mohou lišit už při rozdílu několika stupňů.
  Řešení: Používejte temperační lázeň nebo nechte vzorky stát v  místnosti alespoň 15 minut. Dodržujte pokyny v pracovním postupu dané metody. Některé metody uvádějí způsob korekce na teplotní rozdíl, jiné zas vyžadují striktní dodržení úzkého teplotního rozsahu.
• Nesprávná hodnota slepého stanovení.
  Pamatujte: I běžné rutinní měření si zaslouží ověření čistoty kyvety a správného nastavení přístroje.
• Záměna metody nebo vlnové délky.
  V provozu se občas zapomene přepnout metoda – uložte si přednastavené metody do paměti spektrofotometru nebo používejte kyvety s čárovým kódem v kombinaci se spektrofotometrem HI802 Iris.

HI802: Nový standard v jednoduchosti a přesnosti

Spektrofotometr HI802 přináší kombinaci spolehlivosti, přesnosti a uživatelské přívětivosti, kterou ocení jak zkušené laboratoře, tak i menší provozy.

Co na HI802 zaujme:

• Až 150 předprogramovaných metod a možnost uložit 100 vlastních.
• Vysoká přesnost a stabilita měření – díky preciznímu nastavení vlnové délky a optickému systému s děleným paprskem.
• Pro všechny hranaté kyvety a 16mm vialky – s čárovým kódem i bez
• 256 měření při otáčení kyvety s čárovým kódem – eliminace chyb z důvodu nečistot nebo mikroskopických závad skla kyvety
• Přímý export dat přes USB nebo SD kartu – ideální pro audit a archivaci.
• Kompaktní provedení vhodné i do menších prostor, dobíjecí baterie pro až 3000 měření v terénu.

VIS spektrofotometr HI802 je navržen pro denní použití, ale zároveň nabízí robustní řešení pro akreditované laboratoře i náročné provozy. Podívejte se na HI802 na našem webu, kde si také můžete stáhnout produktový list s podrobným popisem.

Závěr: Spektrofotometrie zůstává oporou přesné analýzy

I když je spektrofotometrie zavedenou technikou, stále vyžaduje pozornost na detaily. S přístrojem, který vám práci usnadní, jako je HI802, a se správným postupem můžete dosahovat spolehlivé a důvěryhodné výsledky i při každodenní rutinní analýze.

Chcete si přístroj vyzkoušet nebo se dozvědět více? Kontaktujte náš tým – rádi vám poradíme nebo předvedeme měření na vašich vzorcích.